Revista
Biorrefinería
Vol.
2


.
2


Año:
2019
ISSN:
2602-8530
55
Para
la

recolección

de

las

cepas

endógenas

a
partir
de

plantas

que

carecen

de

corteza,

tales
como
las

leguminosas,

los

tejidos

sanos

(tallos,
hojas
y
raíces)
se
deben
picar
en
trozos
pequeños
(3

cm

a

5

cm)

y

enjuagar;
posteriormente,
se
deben
esterilizar
con
hipoclorito
de

sodio

al

1%

durante

4

min

a

5

min
y
con

tiosulfato

de

sodio

al

2,5%

durante

10

min
para
eliminar

el

cloro

residual;

y

finalmente

se
deben
enjuagar

y

pasar

por

alcohol

al

75%
durante
1

min.

Los

tejidos

se

secan

bajo

una
cámara
de

flujo

laminar,

se

cortan

en

trocitos
de
aproximadamente

0,5

cm

y

se

transfieren

a
placas
de

Petri

con

el

medio

de

cultivo

(Wang
et
al.,

2015).


Para
la

recolección

a

partir

de

árboles,

se

debe
retirar
un

trozo

de

corteza

del

tronco

a

una
altura
de

1,60

a

1,70

m,

y

con

un

objeto

corto
punzante
extraer

astillas

triangulares

de

0,8

cm
x
0,5

cm,

como

indica

la

figura

1.

El

material

se
lleva
al

laboratorio,

donde

se

escinde

con

una
cuchilla
y
con
pinzas
se
toman
muestras
internas,
las

cuales

se

depositan

en

los

medios
de
cultivo

(Evans

et

al.,

2003).
Fig.
1.

Cortes

efectuados

en

el

árbol

para

la
toma
de

muestras

(Evans

et

al.,

2003).
Para
recolección
de
cepas
del
suelo
se
suspenden
las

muestras

de

rizósfera
en
solución
salina

0,9

%

p/v,

luego

se

toman
alícuotas
para

inocular

platos

de

PDA

con
antibiótico
y

se

hacen

repiques

hasta

obtener

la
cepa
pura

en

medios

selectivos

(Larralde-
Corona
et

al.,

2008).

Otros

autores

reportan
para
la

suspensión

de

las

muestras

de

suelo
sólo
agua

destilada

estéril

en

proporción

de
1/1000
(Sánchez
López,
Martínez
Bolaños,
Zavala
González,

y

Ramírez

Lepe,

2012).
Aislamiento
En
la

tabla

1

se

mencionan

los
principales
medios
de

cultivo

reportados

en

la

literatura
para
el

aislamiento

del

Trichoderma

spp.:
Tabla
1.

Medios

de

cultivos

reportados

para

el
aislamiento
de

Trichoderma

spp.
Medio
Suplemento
Referencia
Agar
Peptona
Dextrosa
Rosa
bengala

y
estreptomicina
(Martin,
1950)
Agar
Papa
Dextrosa
Penicilina
y
estreptomicina
(Evans
et
al.,
2003)
Agar
Extracto
de
Malta
Cloranfenicol
(Evans
et
al.,
2003)
Agar
Papa
Dextrosa
Cloranfenicol
(Wang
et

al.,
2015)
Medio
selectivo

Cloranfenicol
(Sánchez
López
et

al.,
2012)
Para
el

empleo

de

estos

medios

de

cultivo

se
reportan
tiempos

de

incubación

de

una

semana
a
25

°C

(Martin,

1950),

ocho

semanas

a

25

°C
(Evans
et

al.,

2003)

y

cuatro

días

a

28

°C

en
condiciones
de

oscuridad

(Zhang

et

al.,

2016).


Purificación
Las
cepas

se

purifican

en

Agar

Papa

Dextrosa
(PDA,
por

sus

siglas

en

inglés)

(Thongram,
Sarangthem,
Gourshyam,
y
Bharat,
2013),
medio
Extracto

de

levadura-Peptona-Dextrosa
(YPD,
por

sus

siglas

en

inglés)

(Larralde-Corona
et
al.,

2008)

o

Agar

Zanahoria

Papa

a

25

°C

en
condiciones
de

oscuridad

(CPA,

por

sus

siglas

en
inglés)
(Evans

et

al.,

2003)

durante

20

días

(Lang
et
al.,

2015)

y

se

hacen

repiques

cuantas

veces
sea
necesario

hasta

obtener

cepas

axénicas.